产品简介 技术流程 样本要求 案例分析 FAQ

技术简介.png


单细胞转录组测序(Single Cell RNA Sequencing)是在单细胞水平对mRNA进行全转录组扩增及高通量测序的一种高端技术,研究单个细胞内的整体基因表达情况,以及基因的结构变异;主要用于细胞分子机制中细胞异质性研究、以及样本量少而无法进行常规高通量测序等。


优势.png


单细胞转录组测序优势.png


应用领域.png


单细胞转录组测序应用领域.png

技术路线.png

image.png

样本要求.png

       样品要求

1)细胞分离:由合作方完成单细胞分离;

2)样品类型:活体新鲜完整细胞;不适于经固定、染色等处理的样本;

3)样品体积:在显微镜或其他设备辅助下分离,得到的单细胞样本体积以不高于1μl为宜;

4)送样量:建议重复单细胞样本个数不小于5个。

 

其他要求

1)直接使用公司提供的0.2mL平盖PCR管作为采集管,管盖标注编号;细胞样本需采用缓冲液洗涤;裂解液避免反复冻融,注意避免起泡;

2)操作过程中请尽量将采样管置于低温环境下(如冰上)。 样本采集管需要用Parafilm封口膜缠绕封口,装入PCR管盒,橡皮筋固定,再装入自封袋,-80℃暂存,大体积干冰运输;防止液体状态下管身颠倒使细胞附于采样管内壁上部;

3)送样量:单细胞转录组扩增,建议重复单细胞样本个数不小于5个;

       4)细胞采样后,请置于96孔管盒中,避免采样管倾倒,尽快寄送,若需保存请置于-80℃。


单细胞转录组测序揭示精子tsRNA促进获得性代谢紊乱的跨代遗传


Sperm tsRNAs contribute to intergenerational inheritance of an acquired metabolic disorder

单细胞转录组测序揭示精子tsRNA促进获得性代谢紊乱的跨代遗传.png


1

研究背景


越来越多的证据表明:子代的代谢紊乱现象可以从父亲的饮食中觅得踪迹,但其机制扔不明了。研究人员在高脂饮食诱导的父代肥胖小鼠模型中,发现一类成熟精子中高度富集的小RNA(tsRNAs)可为一种表观遗传信息的载体,将高脂诱导的父代紊乱表型传递给子代。



2

设计思路


单细胞转录组设计思路.png


3

研究结果


父代获得性代谢紊乱性状通过精子tsRNA向F1代传递

研究通过从第五周开始持续喂食F0代雄性老鼠6个月高脂食物(HFD),获得了父亲饮食诱导代谢紊乱的老鼠模型。将HFD和ND组的精子总RNA分别注射进正常的受精卵中,发现来源HFD组精子的后代葡萄糖耐受性受损。通过对HFD组和ND组精子RNA组分的进一步研究发现,片段大小30~40 nt的tsRNA组分造成F1子代代谢紊乱。


精子tsRNA 将父代获得性代谢紊乱传递给F1代.png

图1 精子tsRNA 将父代获得性代谢紊乱传递给F1代

高脂肪饮食父亲小鼠精子的tsRNA使得F1代早期胚胎的基因表达差异化

研究者收集注射了ND和HFD精子tsRNA后的8细胞时期和胚囊期的小鼠胚胎进行比较转录组学分析,发现父本精子的tsRNA影响了子代早期胚胎转录本的变化,差异基因的功能分析揭示HFD的子代小鼠中,多条代谢通路及细胞功能受到了影响,这些差异影响了F1代从胚胎期到成年的代谢基因表达水平,并最终影响F1代的表型。


高脂肪饮食父亲小鼠精子的tsRNA使得F1代早期胚胎的基因表达差异化.png

图2 来自高脂肪饮食父亲小鼠精子的tsRNA 使得F1代早期胚胎的基因表达差异化


4

参考文献


1. Picelli, S., et al. Smart-seq2 for sensitive full-length transcriptome profiling in single cells [J]. Nature Methods. 2013, 10(11): 1096-1098.

2. Q Chen, et al.Sperm tsRNAs contribute to intergenerational inheritance of an acquired metabolic disorder [J]. Science. 2015, 351(6271):1173-1179.


Q单细胞转录组加入ERCC spike-in control作用


AERCC 是一种最常用的RNA spike-ins,一共有92个250-2000bp长度的人造的转录本序列,作为外源参照,在细胞RNA 预扩增之前加入一定浓度ERCC,可以评估建库质量和校正基因定量。ERCC需要按照根据样品的细胞中转录组的量确认加入的比例。目前经过测试的1:100000的稀释比例效果较好


Q从肿瘤组织样本中分选单细胞的方法


A

1将肿瘤组织切下后,经机械破碎,酶解,形成单细胞悬浮液,然后用流式细胞仪进行分选。

从肿瘤组织样本中分选单细胞的方法.png

Anoop P, et al. Science, 2014


在线客服

>>

安诺基因在线客服

客服1 客服2 客服3

电话:400-8986-980