单细胞转录组测序（Single Cell RNA Sequencing）是在单细胞水平对mRNA进行全转录组扩增及高通量测序的一种高端技术，研究单个细胞内的整体基因表达情况，以及基因的结构变异；主要用于细胞分子机制中细胞异质性研究、以及样本量少而无法进行常规高通量测序等。

       样品要求

1）细胞分离：由合作方完成单细胞分离；

2）样品类型：活体新鲜完整细胞；不适于经固定、染色等处理的样本；

3）样品体积：在显微镜或其他设备辅助下分离，得到的单细胞样本体积以不高于1μl为宜；

4）送样量：建议重复单细胞样本个数不小于5个。

其他要求

1）直接使用公司提供的0.2mL平盖PCR管作为采集管，管盖标注编号；细胞样本需采用缓冲液洗涤；裂解液避免反复冻融，注意避免起泡；

2）操作过程中请尽量将采样管置于低温环境下(如冰上)。 样本采集管需要用Parafilm封口膜缠绕封口，装入PCR管盒，橡皮筋固定，再装入自封袋，-80℃暂存，大体积干冰运输；防止液体状态下管身颠倒使细胞附于采样管内壁上部；

3）送样量：单细胞转录组扩增，建议重复单细胞样本个数不小于5个；

       4）细胞采样后，请置于96孔管盒中，避免采样管倾倒，尽快寄送，若需保存请置于-80℃。

单细胞转录组测序揭示精子tsRNA促进获得性代谢紊乱的跨代遗传

Sperm tsRNAs contribute to intergenerational inheritance of an acquired metabolic disorder

越来越多的证据表明：子代的代谢紊乱现象可以从父亲的饮食中觅得踪迹，但其机制扔不明了。研究人员在高脂饮食诱导的父代肥胖小鼠模型中，发现一类成熟精子中高度富集的小RNA（tsRNAs）可为一种表观遗传信息的载体，将高脂诱导的父代紊乱表型传递给子代。

研究通过从第五周开始持续喂食F0代雄性老鼠6个月高脂食物（HFD），获得了父亲饮食诱导代谢紊乱的老鼠模型。将HFD和ND组的精子总RNA分别注射进正常的受精卵中，发现来源HFD组精子的后代葡萄糖耐受性受损。通过对HFD组和ND组精子RNA组分的进一步研究发现，片段大小30~40 nt的tsRNA组分造成F1子代代谢紊乱。

图1 精子tsRNA 将父代获得性代谢紊乱传递给F1代

研究者收集注射了ND和HFD精子tsRNA后的8细胞时期和胚囊期的小鼠胚胎进行比较转录组学分析，发现父本精子的tsRNA影响了子代早期胚胎转录本的变化，差异基因的功能分析揭示HFD的子代小鼠中，多条代谢通路及细胞功能受到了影响，这些差异影响了F1代从胚胎期到成年的代谢基因表达水平，并最终影响F1代的表型。

图2 来自高脂肪饮食父亲小鼠精子的tsRNA 使得F1代早期胚胎的基因表达差异化

1. Picelli, S., et al. Smart-seq2 for sensitive full-length transcriptome profiling in single cells [J]. Nature Methods. 2013, 10(11): 1096-1098.

2. Q Chen, et al.Sperm tsRNAs contribute to intergenerational inheritance of an acquired metabolic disorder [J]. Science. 2015, 351(6271):1173-1179.

（Anoop P, et al. Science, 2014）